NCE was dissolved in Tween® 80 (VWR

NCE was dissolved in Tween® 80 (VWR International PBI Srl, Milano, Italy, 1 mg/mL) under agitation. The solution was sterilized by filtration through a 0.22 μm sterilizing Millipore express filter (Millex-GP, Bedford, OH, USA). Whatmann filter paper (n°1) discs of 6 mm diameter were impregnated with 100 µL of NCE solution. Discs impregnated with 100 µL of Tween and 10 µL (wt/v) of antibiotic (ciprofloxacin hydrochloride monohydrate, 1 mg/mL, Bayer, Milano, Italy) were used as negative and positive control, respectively.

Two discs were prepared for each sample. They were evaporated at 37 °C for 24 h. Bacterial suspension (100 µL), standardized by adjusting the optical density to OD 1 at 600 nm (Shimadzu UV-120-01 spectrophotometer, Shimadzu, Cinisello Balsamo, MI, Italy), was used to inoculate by flooding the surface of suitable agar media for each microorganism considered at their proper growth conditions (see Section 2.5.4). Excess liquid was air-dried under a sterile hood and the impregnated discs were applied at equidistant points on top of the agar medium.

The plates were done in triplicates for each organism and the experiment was performed twice. Plates were checked after incubation at 35 °C and 42 °C for 48 h. Antimicrobial activity was measured as diameter (mm) of the inhibition zone (IZ) around the disc. The results were recorded as means ±SD of the duplicate experiment.

The antibacterial activity of NCE against the bacteria was also evaluated in micro-assays using conventional sterile polystyrene microplates. Each well of the microplate was filled with 100 μL of sterile suitable liquid media for each microorganism considered, 50 μL of inoculums (see Table 4) and amounts of extract at lower concentrations (1:10–1:100,000) were added. Control treatment without NCE was used in the experiment. The microplates were incubated at 37 °C for 24 h. Bacterial growth was determined by OD reading at 630 nm/10 mm pathlength with an ELISA microplate reader (Dynatech ML-3000, Pina de Ebro, España). Bacterial cell concentration was transformed to cells/mL using the reference curve equation.

Kết quả (Việt) 1:

NCE đã giải tán năm Tween® 80 (VWR International PBI Srl, Milano, Italia, 1 mg/mL) theo kích động. Các giải pháp đã được tiệt trùng bằng cách lọc qua một μm 0,22 diệt khuẩn Millipore nhận lọc (Millex-GP, Bedford, OH, MỸ). Whatmann giấy lọc (n ° 1) đĩa đường kính 6 mm đã được ngâm tẩm với 100 ml NCE giải pháp. Đĩa ngâm tẩm với 100 ml Tween và 10 ml (wt/v) của kháng sinh (ciprofloxacin Hiđrôclorua monohydrat, 1 mg/mL, Bayer, Milano, Italia) đã được sử dụng như là tích cực và tiêu cực điều khiển, tương ứng.Hai đĩa đã chuẩn bị cho mỗi mẫu. Họ đã bốc hơi ở 37 ° C cho 24 h. nhiễm khuẩn hệ thống treo (100 ml), tiêu chuẩn hóa bằng cách điều chỉnh mật độ quang OD 1 tại 600 nm (Shimadzu UV-120-01 phối, Shimadzu, Cinisello Balsamo, MI, ý), được sử dụng để cấy bởi lũ lụt trên bề mặt của phương tiện truyền thông thích hợp agar cho vi sinh vật từng được coi là thích hợp phát triển các điều kiện của họ (xem phần 2.5.4). Chất lỏng dư thừa được air-dried dưới mui xe vô trùng và các đĩa impregnated đã được áp dụng tại equidistant điểm khác nhau trên các phương tiện agar.Các mảng được thực hiện trong triplicates cho mỗi sinh vật và các thử nghiệm đã được thực hiện hai lần. Tấm đã được kiểm tra sau khi ủ tại 35 ° C và 42 ° C cho 48 h. kháng khuẩn hoạt động được đo bằng đường kính (mm) của vùng (KCN) ức chế xung quanh đĩa. Kết quả đã được ghi lại như có nghĩa là ±SD của thử nghiệm trùng lặp.Các hoạt động kháng khuẩn của NCE chống lại các vi khuẩn cũng được đánh giá trong micro, thử nghiệm bằng cách sử dụng thông thường khoảng vô trùng polystyrene. Mỗi cũng microplate đã được lấp đầy với 100 μL vô trùng phương tiện truyền thông thích hợp lỏng cho mỗi vi sinh vật được coi là, 50 μL inoculums (xem bảng 4) và số tiền của các chiết xuất ở nồng độ thấp (1:10-1: 100, 000) đã được thêm vào. Điều khiển điều trị mà không có NCE đã được sử dụng trong thử nghiệm. Các khoảng được ủ ở 37 ° C cho 24 h. vi khuẩn phát triển đã được xác định bởi OD đọc tại 630 nm/10 mm pathlength với một đầu đọc microplate ELISA (Dynatech ML-3000, Pina de Ebro, España). Nồng độ tế bào vi khuẩn đã được chuyển đến tế bào/mL, sử dụng phương trình đường cong tài liệu tham khảo.

Kết quả (Việt) 2:

NCE được hòa tan trong Tween® 80 (VWR International PBI Srl, Milano, Ý, 1 mg / ml) được trộn. Giải pháp đã được tiệt trùng bằng cách lọc qua 0,22 mm khử trùng Millipore lọc nhanh (Millex-GP, Bedford, OH, USA). Giấy lọc Whatmann (n ° 1) đĩa có đường kính 6 mm được ngâm tẩm với 100 ml dung dịch NCE. Đĩa tẩm 100 ml Tween và 10 ml (wt / v) của kháng sinh (ciprofloxacin hydroclorid monohydrat, 1 mg / ml, Bayer, Milano, Italy) đã được sử dụng như kiểm soát tiêu cực và tích cực, tương ứng.

Hai đĩa đã được chuẩn bị cho mỗi mẫu . Họ đã bốc hơi ở 37 ° C trong 24 h. Đình chỉ do vi khuẩn (100 ml), chuẩn hóa bằng cách điều chỉnh mật độ quang OD 1 ở 600 nm (Shimadzu UV-120-01 quang phổ, Shimadzu, Cinisello Balsamo, MI, Ý), được sử dụng để cấy cho nước chảy tràn bề mặt của phương tiện truyền thông trường thích hợp cho mỗi vi sinh vật được coi là có điều kiện tăng trưởng thích hợp của họ (xem Phần 2.5.4). Chất lỏng dư thừa được không khí khô dưới mui xe vô trùng và các đĩa ngâm tẩm đã được áp dụng tại các điểm cách đều trên đầu trang của các môi trường thạch.

Các tấm được thực hiện trong triplicates cho mỗi sinh vật và các thí nghiệm được thực hiện hai lần. Các đĩa được kiểm tra sau khi ủ ở 35 ° C và 42 ° C trong 48 h. Hoạt tính kháng khuẩn được đo như đường kính (mm) của vùng ức chế (KCN) xung quanh đĩa. Các kết quả được ghi nhận như là phương tiện ± SD của thí nghiệm trùng lặp.

Hoạt tính kháng khuẩn của NCE chống lại các vi khuẩn cũng được đánh giá trong vi xét nghiệm bằng polystyrene vô trùng thông thường microplates. Mỗi giếng của microplate đã được lấp đầy với 100 ml vô trùng môi trường lỏng thích hợp cho từng loại vi sinh vật được coi là, 50 ml Chế phẩm (xem Bảng 4) và các khoản trích ở nồng độ thấp (1: 10-1: 100.000) đã được thêm vào. Điều trị kiểm soát mà không NCE đã được sử dụng trong thí nghiệm. Các microplates được ủ ở 37 ° C trong 24 h. Tăng trưởng của vi khuẩn được xác định bằng cách đọc OD ở 630 nm / 10 mm pathlength với một đầu đọc microplate ELISA (Dynatech ML-3000, Pina de Ebro, España). Nồng độ tế bào vi khuẩn đã được chuyển đến các tế bào / mL bằng cách sử dụng phương trình đường cong tham khảo.